在qPCR過程中，有很多小伙伴可能不太明白擴增曲線、CT值、基線、閾值線、熔解曲線等這些名詞是什么意思，那今天就讓我們一起來看一看在去PCR過程中那些令人抓狂的曲線。

擴增曲線：在熒光定量PCR實驗進程中，熒光定量PCR儀會對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行實時的檢測并記錄熒光信號，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，記錄的熒光信號也不斷的累積。

擴增曲線就是描述PCR動態(tài)進程的曲線，以循環(huán)數(shù)為橫坐標(biāo)，以反應(yīng)過程中實時熒光信號強度為縱坐標(biāo)。通常見到的熒光定量PCR擴增曲線會有兩種展現(xiàn)形式，分別是對數(shù)圖譜和線性圖譜。

典型的擴增曲線可以分成四個時期：基線期，指數(shù)期，線性期，平臺期。

基線期：擴增曲線的水平部分，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物生成量的變化。

指數(shù)期：PCR“一生二，二生四，四生八”的指數(shù)型擴增，擴增曲線起峰，該時期所有反應(yīng)試劑均有盈余，DNA聚合酶仍保持著高水平的活力，每個循環(huán)的產(chǎn)物量與初始模板量符合指數(shù)關(guān)系，PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，故該時期最適用于定量分析。

線性期：隨著原料的消耗、產(chǎn)物的積累、酶活的損耗等，DNA的擴增不再呈指數(shù)擴增，熒光信號的增長也逐漸放緩，反應(yīng)效率降低，產(chǎn)物量與初始模板量不再符合指數(shù)關(guān)系。

平臺期：由于底物耗盡，酶活性降低等因素，熒光信號不再增加，趨于平穩(wěn)。由于影響PCR擴增的因素錯綜復(fù)雜，每個反應(yīng)進入平臺期的時間和平臺期的高低都各不相同。

基線：基線是PCR最初幾個循環(huán)的背景信號，呈現(xiàn)出起伏較小的直線形態(tài)，此時軟件能夠自動計算出合理的基線范圍。

閾值線：閾值是在熒光擴增曲線上人為設(shè)定的一個值，它可以設(shè)定在熒光信號指數(shù)擴增階段任意位置上，一般熒光域值的設(shè)置是基線（背景）熒光信號的標(biāo)準(zhǔn)偏差的 10 倍。熒光域值設(shè)定在 PCR的指數(shù)增長期。

CT值：每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號到達設(shè)定的域值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)被稱為 CT值

熔解曲線和Tm值：熔解曲線(Dissociation curve)是指隨溫度升高DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)降解程度的曲線；總的DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)降解一半的溫度稱為熔解溫度（Tm），不同的PCR產(chǎn)物由于GC含量，片段大小，鹽離子濃度的不同，其對應(yīng)的Tm值也不同，因此可以根據(jù)Tm值對PCR產(chǎn)物的特異性進行驗證。

標(biāo)準(zhǔn)曲線：通常情況下將已知濃度的樣品經(jīng)過梯度稀釋后分別取樣進行熒光定量PCR，得到一系列的CT值，以濃度的對數(shù)作為橫坐標(biāo)，CT值為縱坐標(biāo)繪制曲線，即可得到一個標(biāo)準(zhǔn)曲線。

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